Substancia Bazo - Constrictora
extraída de las semillas del
género citrus
Por: Dr. Francisco T. Macías B.*
Ya que se trata de la presentación ante los distinguidos
miembros de la Sociedad Médico — Quirúrgica y estudiantes de
medicina, aquí reunidos, de una substancia bazo — constrictora
extraida de la semilla del género citrus: m étodo de obtención,
presentación del medicamento, trabajos experimentales realiza
dos y casos clínicos de terapéutica aplicada, voy a hacer una pe
queña narración acerca de cóm o se desarrolló esta investigación,
su fuente de origen, sus propulsores y los resultados obtenidos y
la aplicación terapéutica que puede dársele.
En el año 1934, siendo estudiante de Patología General,
con el Dr. Gabriel Burbano tuve que hacer una pequeña charla
sobre Nosología y Nosografía y para ello me puse en contacto
con empíricos de nuestros campos para que ellos me revelaran el
secreto de la curación de enfermedades según las conciben y las
tratan. Fué esta ocásión la que me hizo aprender que las semi
llas de género citrus eran utilizadas com o antifebri'fugas y se les
atribuía la curación del paludismo. El eminente clínico guaya-
quileño Dr. Alejo Lascano recetaba a la gente pobre infusión de
semillas con ese fin. Uno de sus familiares colaboró en mi idea
y comencé a efectuar ensayos en la calle y en la Sala San José de
este hospital, servicio del Dr. Heinert. Uno de los efectos tera
péuticos que me llamó la atención fué la contracción inmediata
y posteriormente permanente de los bazos en los enfermos de
paludismo. Muchos médicos participaron de mi interés de inves
tigación acerca de esta acción espleno — constrictora y el Dr.
Clodoveo Alcívar me facilitó su laboratorio con el fin de tratar
de tener un producto inyectable, pasando pues, de la infusión
Trabajo presentado ante La Sociedad Médico-Q u irú rg ica del Guavas
Agosto 18 de 1943.
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de semillas a la preparación de una solución concentrada, filtra
da en caliente y envasada en ampollas de 1 centímetro. Luego
hice un ensayo con los doctores Izquieta Pérez, Montalván e In-
sua quienes vieron los primeros resultados de esta investigación.
Más tarde el Dr. Darío Moral me ayudó en el campo experimen
tal y comencé a purificar el extracto que había obtenido por
concentración de la infusión de semillas. Realizamos estudios
analíticos, más o menos completos y seguimos algunos casos clí
nicos. Durante estos primeros años de experimentación puse en
claro que el extracto de semillas dado en solución o en sellos en
la dosis de 1 gramo durante 7 días, daba resultados satisfacto
rios en enfermos palúdicos con esplenomegalias congestivos.
Las inyecciones preparadas en colaboración del Dr. Darío Moral
eran un poco más purificadas, pero contenían muy poca canti
dad de principio activo porque usábamos soluciones alcohólicas
en su preparación, quedando en el precipitado la mayor canti
dad del principio activo, el cual no usábamos. Las observacio
nes clínicas de los enfermos tratados en esta forma nos hizo pre
ferir la via oral. En nuestro empeño de obtener la purificación
del extracto usábamos el carbón animal para la clarificación de
las soluciones. Encontramos presencia de ácido málico y ácido
cítrico, separamos gomas, reciñas, aceites, determinamos Ph y
observamos que las soluciones de extracto de semillas reducían
el licor de Pheling. El Dr. Fassio hizo ciertas aplicaciones con
resultados satisfactorios con las inyecciones preparadas en este
Laboratorio: Tuve la oportunidad de tratar enfermos de los
doctores A. Serrano y T. Maldonado en que se puso de manifies
to la acción benéfica del medicamento en las esplenomegalias
palúdicas y en los paludismos crónicos. Uno de mis colegas el
Dr. Oscar Paladines acreditó el medicamento sometiéndose al
tratamiento. Muchos fueron los enfermos tratados que manifes
taron haber sido beneficiados. Al presentárseme la oportunidad
de viajar a los Estados Unidos llevé a la Universidad de Michi
gan, extracto crudo e inyecciones, planteando el trabajo de in
vestigación de la siguiente manera:
28 REVISTA DE LA
I o . Investigar la acción fármaco dinámica del medicamento en
animales — Ver su toxicidad y la dosificación terapéutica.
2o . Purificación del extracto a fin de obtener el principio acti
vo.
3o . Aplicación clínica — terapéutica en el hombre.
4o . Análisis quím ico del principio activo.
Las observaciones clínicas realizadas en la primera etapa de
mi investigación me hizo presentar ante la Universidad de Michi
gan U.S.A. el estudio de una substancia, que se encontraba en la
semilla del género citrus, que producía la contracción del bazo
sin alterar la presión arterial, provocaba estímulo respiratorio y
que aumentaba la amplitud del pulso. Los trabajos realizados
en Michigan están resumidos en el siguiente artículo en el Jour
nal o f Pharmacology and Experimental Therapeutics. — V ol 77
N °. 4. — April 1943, que dice:
UNA SUBSTANCIA BAZO CONTRACTIL EN LA SEMILLA
DE NARANJA
Poí Francisco Macías (*), Ralph Smith y Foster N. Martin Jr.(
del Departamento de Farmacología de la Universidad de
Michigan, Escuela de Medicina Ann Albor, U.S.A.
Recibida para publicación Agosto 31 de 1942.
El interés de este descubrimiento com enzó por el uso de
uno de nosotros Francisco T. Macías, de un extracto crudo de
semillas de naranjas en el tratamiento de la Malaria en el Ecua
dor.
(*) Becado por el Instituto de Educación Internacional.
UNIVERSIDAD DE G UAYAQU IL 29
Un efecto que había observado fué la contracción de los
bazos grandes en los pacientes con esta enfermedad. El presente
artículo concierne a la descripción dé la preparación del extrac
to crudo, su parcial purificación y su acción farmacológica con
particular referencia de sus efectos sobre el bazo.
PREPARACION DEL EXTRACTO CRUDO: - Dos kilogramos
de semillas enteras de naranjas se ponen en un saco de algodón y
se extrae el principio activo, haciendo hervir las semillas por una
hora en 10 litros de agua. Esta atracción se repite dos veces con
10 litros por una hora y 2 veces con 5 litros por 45 minutos.
Continúa la extracción hasta tener un volumen de 40 litros de a-
gua en un período de 4 1/2 horas. Se combinan todos los líqui
dos qúe se recogen y se los evapora a llama abierta hasta un vo
lumen aproximadamente de 8 litros. Entonces la solución se
vuelve de consistencia de jarabe y de color café. Esta evapora
ción se continúa en baño de maría hasta que queda de consis
tencia semi sólida. 600 gramos de este producto café negrusco
de consistencia de jalea, contiene aproximadamente 40 o /o de
agua. Este preparado es al que le damos al nombre de extracto
crudo; este material forma una solución coloidal cuando se le
añade agua. Se disuelve más fácilmente en agua caliente. Cierta
cantidad de materia insoluble se separa por centrifugación. La
solución de extracto crudo es amarga, tiene un pH. aproximada
mente de 4.5 titulado la acidez de 3.7 cc. NaOHpor gra
m o y reduce la solución de Benedict’ s.
T O X IC ID A D .- La Tonicidad del extracto crudo fué de
terminada en ratones blancos administrándoles inyecciones sub
cutáneas de una solución que contiene 0 .2 5 gramos del extracto
crudo por cc. El resultado indicado en la tabla N °. 1, muestra
la respectiva baja toxicidad. La L.D .0'(J es aproximadamente 7
miligramos, una dosis mortal es de 10 miligramos y una dosis te
rapéutica es de 5 miligramos por gramo de peso. Con este resul
tado fué posible determinar las dosis necesarias en los perros pa
30 REVISTA DE LA
ra producir los efectos más abajo descritos. Después de 2 minu
tos de haber sido puesta la inyección en los ratones blancos, la
respiración se hizo lenta y profunda y con dosis grandes se pro
dujo disneas. Estos cambios respiratorios en los ratones blan
cos, fueron acompañados con disminución de su actividad m o
tora, aparente depresión y debilidad. Aunque los animales se hi
cieron fácilmente irritables ellos no respondieron con gritos o
chillidos; algunos de los ratones que murieron mostraron un au
mento de su actividad justamente hasta antes de morir con m o
vimientos convulsivos de sus colas y sus piernas. Algunos rato
nes pertenecientes a cada uno de los otros grupos, murieron ho
ras después en relación de los otros incluidos en la tabla N °. 1.
Once ratones se inyectaron con extracto crudo de 7 1/2 a 1
miligramos, por gramo de peso, neutralizando con hidróxido de
sodio y mostraron las mismas manifestaciones, aunque solamen
te uno no murió.
ACCION DEL EXTRACTO C R U D O .- La contracción del ba
zo se pone de manifiesto al inyectar intravenosamente, una do
sis de 0.05 a 0.5 gramos de solución de extracto crudo en ani
males de peso de 8 a 18 kilogramos a los cuales se los anestesia
con pentabarbital sódico (35 miligramos por kilogramo de peso
via intravenosa). La contracción del baso se gráfica por medio
de una ancómiter, la contracción se inicia a pocos segundos des
pués de la inyección y se mantiene durante diferentes períodos.
La duración de la contracción varia según la dosis y según el pe
rro. Ocasionalmente el bazo se dilata hasta su porte normal du
rante algunos minutos y en el mismo animal se puede producir
la contracción repetidas veces. En algunos perros con dosis
grandes o con repetidas dosis la contracción del bazo persiste
por horas. En conclusión la contracción del bazo de un perro
puede durar de 2 a 5 horas que es el tiempo que dura la experi
mentación; la observación directa del bazo al final de la experi
mentación demuestra estar de consistencia dura y reducida a la
mitad o menos de la mitad de su porte original.
UNIVERSIDAD DE G UAYAQU IL 31
TABLA N °. 1
Determinación de la toxicidad del extracto de las semillas
de naranja en ratones blancos por medio de inyecciones subcu
táneas.
Número de ratones Dosis (m.g.m gm. peso) Mueren Murieron después
de minutos.
5 20.0 5 68(4 ratones)
5 10.0 5 181(4 ratones)
5 7.5 4 137(3 ratones)
5 6.25 1 50
10 5.0 0
La forma com o se contrae el bazo no es constante, a veces
se observa una fuerte contracción seguida de una dilatación y
finalmente después de 2 a 5 minutos, la contracción se hace per
sistente, (Experimento No. 1). En otras ocasiones usando solu
ciones de extracto crudo parcialmente purificado.
Administrando por vía oral un gramo de extracto crudo
por medio de una sonda esofágica, se produce una fuerte y pro
longada contracción del bazo, (cuadro N °.2 ). La contracción
del bazo cuando se administra el medicamento por vía oral nos
hace pensar que es debido a un reflejo que parte de la mucosa
gástrica ya que es muy difícil concebir la absorción del medica
mento en tan poco tiempo, pues la contracción del bazo se pro
duce pocos segundos después de su administración.
Inmediatamente después de una inyección intravenosa de
extracto crudo se observa un descenso de la presión arterial por
pocos segundos. Inmediatamente se normaliza o se produce una
ligera hipotensión, pero si se administra lentamente, este cambio
en la presión arterial no se produce, pero el bazo se contrae, lo
cual demuestra que la contracción del bazo se hace independien
te. Cuando se toma la gráfica del volumen del riñón, los
32 REVISTA DE LA
pequeños cambios en su volumen están en relación a los peque -
ños cambios de la presión arterial lo que es constante observar
cuan do se pone repetidas dosis, en el aumento de la ampli
tud del pulso.
La atropina inhibe parcialmente la acción del extracto cru
do, pero en grandes dosis (de 2 a 3 miligramos por kilogramo)
en algunos animales de experimentación se ha obtenido neutrali
zar la acción del extracto por medio de la atropina.
En relación a la acción del extracto crudo sobre la respira
ción, se observa en algunos casos que el extracto crudo produce
un estimulo respiratorio, y en grandes dosis un período de ap-
nea.
PURIFICACION: — Para hacer el estudio farmacodinámico del
extracto crudo era necesario tratar de purificarlo con el fin de
aislar la gran cantidad de material inerte en el contenido y de
encontrar el principio activo.
Cada una de las porciones aisladas fueron envasadas en pe
rros con el fin de encontrar la parte del extracto que producia la
contracción del bazo. Fueron utilizados 40 perros y en el cua
dro N °. 2 está anotado de 9 experimentos representativos. Mu
cha dificultad se encontró en la purificación del extracto crudo,
ya que el principio activo y el material inerte eran más solubles
en agua que en cualquier otro disolvente. El principio activo es
relativamente insoluble en éter sulfúrico, éter de petróleo, ace
tona deshidratado, cloroform o, cloruro de metilo, letacloruro
de carbono, pues todos ellos dejaban mucho material inerte en
solución y principio activo en el residuo.
Un buen inicial paso de purificación, fué la filtración de la
solución acuosa del extracto crudo por medio del carbón ani
mal; obteniéndose una filtración clara que provocaba la contrac-
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cion del bazo. Pero, el procedimiento es demasiado largo y es
necesario filtrar repetidas veces, además que todos los carbones
de origen animal no tienen el mismo poder de clarificación.
Un buen procedimiento fué el tratar el extracto crudo con
una solución de hidrato de cal al 2 o /o hasta obtener la gelifica-
ción del material inerte. Y, luego, por filtración se separa una
solución con el principio activo quedándose la masa gelatinosa
en el filtro la cual no es activa.
Por medio del alcohol se logra separar una gran cantidad de
material inactivo, pero siempre queda una parte del principio
activo en el residuo insoluble, especialmente en soluciones alco
hólicas entre 60 y 70 o /o . En alcohol de 95 o /o es posible p o
der extraer una pequeña cantidad de principio activo, pero usan
do de 20 a 30 volúmenes. La parte del principio activo soluble
en alcohol se deseca en aire corriente o en baño de María y lue
go se disuelve en agua. En este procedimiento parte del princi
pio activo se pierde por la evaporación y la solución acuosa deja
un precipitado de reciñas. Experimento N °. 7 Tabla N °. 2.
Un m étodo que parece ser uno de los que dio mejores re
sultados fué el tratar el extracto con hidrato de cal, reducir lue
go el volumen de la solución a 1/10 evaporarla en baño de María
y aumentar alcohol absoluto hasta obtener una concentración
de 90 o /o por volumen; separar el precipitado por centrifuga
ción y tratar la solución con 2 volúmenes de éter sulfúrico; cen
trifugar para separar la parte insoluble en éter en la cual está
contenida la mayor parte del principio activo. Figura N °. 1 Ta
bla N °. 2 Experimento N °. 9.
La purificación del extracto crudo por medio del acetato
básico del plom o no dio buen resultado por encontrarse más
principio activo en el precipitado que en la solución.
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Pensando que el principio activo podia tener propiedades
de un alcaloide se lo trató com o tal haciendo soluciones alcali
nas de extracto crudo con amoníaco o carbonato de sodio.
La extracción por medio del éter dio mejores resultados
que el cloroform o. Haciendo una extracción por cinco a diez
horas en su extracto de Wathin’s resultó incompleta, ya que no
fué posible saturar la solución con cloruro de sodio, pero el
principio activo si fué posible parcialmente extraerle agitándole
en agua acidificada en un embudo de separación. La mayor par
te del producto obtenido asi produciría contracción del bazo
con aumento de la presión arterial y el residuo también contraía
el bazo, pero haciéndola descender fuertemente. Tabla N °. 2
Experimento N °. 8.
En algunos casos una dosis obtenida de 0.1 gramo de ex
tracto crudo producía la caída de la presión arterial de 10 a 15
m.m. Hg. volviendo a su estado normal después de 10 a 15 mi
nutos, más despacio que en el experimento citado en la Tabla
N °. 2. Llegando a pensarse que exista más de un principio ba
zo — constrictor y que la moderada acción que produce el ex
tracto crudo sobre la presión arterial sea la combinación de es
tos dos efectos.
Pensando que com o el extracto crudo contiene ácidos or
gánicos y que uno de ellos podía ser el principio activo del ex
tracto crudo de semillas de naranja que contrae el bazo, se hizo
inyecciones que se administraron intravenosas a perros de 10
kgms. de peso de 0.030 de ácido ascórbico; 0.050 mg. de ácido
málico; 0.020 mg. de ácido cítrico; 0.020 mg. de ácido succí-
nico pero todos resultaron inactivos.
DISCUSION.— Aunque ha quedado demostrado que el extracto
crudo de semillas de naranja contiene un principio activo que
contrae el bazo, los métodos de extracción no han llegado aún
UNIVERSIDAD DE G UAYAQU IL 35
a ser perfectos quedándose mucha parte del principio activo
unido al material inerte.
Sin embargo, se ha obtenido progresos definitivos en su pu
rificación obtenida por el procedimiento hidróxido de cal — al
cohol — éter.
Los bazos en todos los animales mostraron diferente sensi
bilidad y en un mismo animal la administración de dosis conti
nua producen la contracción del bazo hasta su máximo fisioló
gico, perdiendo su acción cuando materialmente es imposible
que el bazo se contraiga más.
SUMARIO.— El extracto de semillas de naranjas contiene un
principio soluble en agua de baja toxicidad y que produce una
fuerte contracción del bazo. Aunque el principio activo no ha
sido aislado, definitivos progresos se han hecho en su purifica
ción” .
De regreso de los Estados Unidos y continuando mis inves
tigaciones clínicas en Guayaquil, con productos más purificados
obtuve el apoyo incondicional del Dr. Luis Moral para la prepa
ración de mis inyecciones, empleando métodos de mi propia ex
perimentación, no publicados todavía y, por medio de los cuales
las soluciones pueden ser estrictamente dosificadas en su conte
nido de principio activo por métodos colorimétricos. De tal ma
nera que un centímetro cúbico de la solución inyectable contie
ne un miligramo del principio activo parcialmente purificado es-
pleno — constrictor. Con este material preparado me ha sido
posible efectuar 25 observaciones clinícas con los doctores Hei-
nert, Tanca, Valenzuela, Torres León, L. Moral, Gómez Lince,
Arturo Serrano y A. Rigaíl y en mis propios pacientes, en las
salas del Hospital y en mi Consultorio. Los resultados obteni
dos son los siguientes:
36 REVISTA DE LA
Administrando las inyecciones por vía intramuscular o in
travenosa se observa la contracción del bazo sin mayores cam
bios en la presión arterial. Algunos enfermos presentaron estí
mulo respiratorio, aumento de la amplitud del pulso y contrac
ción inmediata del bazo a los 2 o 3 minutos de haber adminis
trado la inyección por via intravenosa. La disminución del vo
lumen del bazo se hace preferentemente en sentido longitudi
nal de 2 a 3 traveces de dedos, según el enfermo haya presenta
do un bazo congestivo o más o menos escleroso. Los bazos pa
recen a la palpación aplanarse en sentido de su espesor y al pal
par el borde anterior clínico del bazo la escotadura se hace más
perceptible siendo posible por la reducción del volumen en sus
3 diámetros la incidencia de los dedos por debajo del borde cos
tal. La contracción realizada después de una inyección intrave
nosa de 2 miligramos permanece invariable a las 24 horas de ob
servación.
La administración de inyecciones por vía intramuscular de
2 miligramos no produce contracciones tan violentas.
La administración oral de un gramo de extracto crudo en
solución produce la contracción a los pocos minutos, observán
dose reacción febril en algunos casos.
Durante el período de 2 semanas, inyecciones diarias de 2
miligramos a 6 miligramos han sido administradas a enfermos se
gún el volumen de su bazo. Obteniendo las siguientes observa
ciones:
Los bazos esclerosos sufren una contracción permanente y
progresiva; muchos de ellos se ablandan, se aplanan y se reco
gen, quedando ptosados por estiramiento de sus ligamentos.
Observándose que bazos inmóviles durante este período de tra
tamiento se hacen fácilmente desplazables.
Efectos similares se han observado en la administración por
vía oral.
UNIVERSIDAD DE G UAYAQU IL .37
CONCLUSIONES.— El tratamiento de las esplenomegalias por
medio de la substancia extraída de la semilla del género citrus,
es efectiva y está de acuerdo a la siguiente dosificación:
a) Usar de 10 a 12 inyecciones intravenosa de 2 miligramos
en 2 centímetros cúbicos de solución acuosa, inyectadas
diariamente.
Descansar una semana y comenzar otra serie si es necesaria
según los resultados obtenidos.
b) Usar 10 a 12 inyecciones intramusculares de 2 miligramos
en 2 centímetros cúbicos de solución acuosa.
c) Administrar unos o dos gramos de extracto crudo en sellos
durante un período de 2 semanas.
En esta forma y con esta dosificación es posible obtener re
sultados beneficiosos en las esplenomegalias congestivas y escle
rosas crónicas sin tener en cuenta su volumen ni el tiempo de su
cronicidad.
Y para finalizar la presentación de este trabajo pongo a la
consideración de ustedes señores doctores miembros de esta so
ciedad médico — científica, los resultados obtenidos con la apli
cación clínica — terapéutica del Extracto de semillas del género
citrus por vía oral, y de la substancia esplenoconstrictora par
cialmente purificada proveniente de este extracto y, que he po
dido administrarlo en forma inyectable, en los enfermos aquí
presentes para su verificaciórt.